【25-OH-VD（夹心法）】对标质谱金标准

2023/11/9 17:07:05　浏览次数：1607

引言

25-OH-VD免疫检测方法

DEQAS（英国维生素D定量评估认证机构）是全球评估维生素D检测的专业权威机构，DEQAS室间质评是世界权威维生素D检测实验室室间质评之一。根据DEQAS室间质评统计结果显示，免疫检测法是25-OH-VD临床检测普及度最高的检测方法（图1）。

图1. 用于检测 25-OH-VD2和 D3的方法分布

25-OH-VD 免疫检测市售IVD试剂共性问题

共性问题

随着时间分辨免疫荧光、电化学发光等检测技术的不断涌现，免疫测定法的敏感性和特异性也有所提升，但由于小分子免疫检测技术方法学本身的不足及抗体特异性较低，免疫检测结果与LC-MS/MS检测结果仍有较大差距。

临床研究

中国医学科学院北京协和医院检验科与中日友好医院检验科研究人员对市场上主流五大品牌（雅培、DiaSorin、IDS、罗氏、西门子）的25-OH-VD检测试剂进行了比对，发现这些试剂的检测结果与LC-MS/MS检测结果临床判定一致率不到71%。当样本中含有25-OH-VD2时，无论何种CLIA体系竞争法与LC-MS/MS检测结果的相关性均下降。

与LC-MS/MS检测结果一致性差

表2. 不同CLIA竞争法

与LC-MS/MS临床判定一致性

注：A、B、C、D、E依次代表雅培、DiaSorin、IDS、罗氏、西门子。其中雅培、IDS和西门子采用的是AE化学发光竞争法，DiaSorin采用的是异鲁米诺衍生物直接化学发光竞争法，Roche采用的是电化学发光竞争法。

25-OH-VD2识别不佳

表3. 25-OH-VD2含量对

CLIA竞争法检测结果的影响

注：表3中数据为与LC-MS/MS的比较结果；表2、表3数据来源于参考文献——禹松林,邱玲,方慧玲,等.五种自动化免疫学方法和液相色谱串联质谱方法测定25羟维生素 D 的比较[J].中华检验医学杂志, 2015(7):5。

25-OH-VD 新突破夹心免疫分析法

小分子化合物与对应抗体的结合位点多为穴状结构，小分子的大部分结构被覆盖，导致抗体结合空间不足，传统夹心免疫分析技术难以检测小分子，所以市售VD检测试剂盒大多采用竞争法。2023年欧凯生物成功突破小分子夹心抗体技术开发壁垒，生产出适用于夹心免疫分析的VD抗体。

夹心法优势

高剂量钩状效应

低剂量钩状效应

25-OH-VD 夹心抗体与LC-MS/MS相关性>0.96

为提高25-OH-VD免疫检测结果与LC-MS/MS检测结果的一致性，欧凯生物优化了抗体设计策略，提升了VD夹心抗体的特异性。

经检测欧凯生物25-OH-VD夹心抗体（R484j4、R483k3）能有效识别样本中的总25-OH-VD，在直接化学发光及酶促化学发光平台的检测结果与LC-MS/MS一致性良好，相关性（R2）分别可达0.9607、0.9722。

产品优势

总25-OH-VD识别能力直接化学发光平台

25-OH-VD抗体与25-OH-VD2的交叉反应能力直接影响总25-OH-VD检测结果的准确性。经验证欧凯25-OH-VD夹心抗体（R484j4、R483k3）与25-OH-VD2、25-OH-VD3有很好的交叉反应性，可有效识别样本中的总25-OH-VD。

图2.总VD识别能力

表4.总VD识别能力数据

样本符合率直接化学发光平台

经验证25-OH-VD夹心抗体（R484j4、R483k3）检测结果与LC-MS/MS检测结果的一致性良好，相关性（R2）可达0.9607，经客户验证相关性（R2）可达0.945。

图3.临床对比分析（自测）

图4.临床对比分析（客测）

样本符合率酶促化学发光平台

经验证25-OH-VD夹心抗体（R484j4、R483k3）检测结果与LC-MS/MS检测结果的一致性良好，相关性（R2）可达0.9722。

图5.临床对比分析（质谱）

表5.临床对比分析数据

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南京欧凯生物科技有限公司（简称南京欧凯生物）是一家体外诊断原料整体解决方案提供商，一直致力于体外诊断用蛋白及抗体的快速开发及规模化生产。南京欧凯生物坚持自主创新，不断突破关键技术，拥有SingleB®快速单抗发现平台、BGE®高通量表达平台、DeepLight®功能前置化筛选平台、大分子纯化平台，用以支撑产品持续迭代；南京欧凯生物通过ISO 9001/ISO 13485质量体系双认证并坚持持续优化，结合自建的免疫层析平台、免疫比浊平台、化学发光平台，有效保证产品在生产过程和最终交付的质量稳定性，为产品性能和产品质量提供有力保障。