中国作为慢性乙肝感染人数第一的乙肝大国，HBV核酸检测在现在及未来很长一段时间都是最大的非新冠核酸市场，而乙肝DNA同质化竞争已非常激烈，在此市场格局下，乙肝新指标HBV RNA或许是进军乙肝核酸检测领域非常好的选择。

全球第一个商品化的HBV RNA检测试剂盒（SAT，RNA捕获探针法）上市已一年有余，如今RT-PCR（PCR-荧光探针法）检测试剂也已上市。买东西都讲究 “货比三家，择优购买”，我们今天就从实际应用角度，来看看该如何选择HBV RNA产品。

选灵敏度高的

众所周知，HBV RNA最早被临床认知的应用场景就是指导安全停药。举个简单的例子，有10位长期接受抗病毒治疗的乙肝患者，患者有停药意向，因而检测HBV RNA评估停药后复发风险。使用普通灵敏度的试剂检测有6位患者HBV RNA阴性，而选择高灵敏度的试剂检测发现其实只有4位患者是阴性，说明普敏检测漏检，出现了假阴性，此时，若选择普通灵敏度试剂的检测结果为标准指导停药，可能会造成2位漏检患者疾病复发。

或许这个故事听起来似曾相识？

不错，同样的剧本乙肝普敏DNA和高敏DNA也演绎过。

众所周知，乙肝DNA与肝癌的发生密切相关，而普敏乙肝DNA检测阴性的患者中，仍然有25%的患者发展成为肝癌。

为什么？

这些所谓的“阴性患者”，其实是阳性的，只不过因为乙肝普敏DNA灵敏度不够，不能识别这一群DNA低载量的患者罢了，高敏DNA便在这样的形势下应运而生。而检测灵敏度对于HBV RNA的重要性比DNA更甚，对于经治后的慢乙肝患者HBV RNA载量普遍较低，普通灵敏度的检测产品在评估停药后复发风险方面，非但无法给予临床有效指导，甚至还会误导医生判断，贻误病情或导致疾病复发。

那该如何评估HBV RNA检测产品的灵敏度？

检测下限和定量下限作为衡量灵敏度的标尺，可以作为我们选择产品时的重要依据。

目前市场上两种不同方法学的HBV RNA检测产品中，RT-PCR（PCR-荧光探针法）试剂检测下限为300 copies/mL，SAT（RNA捕获探针法）检测试剂因其独有的检测方法，检测下限为50 copies/mL；从定量范围来看，RT-PCR（PCR-荧光探针法）的定量从1000 copies/mL开始，SAT（RNA捕获探针法）的定量从100 copies/mL开始。由此可见，SAT（RNA捕获探针法）灵敏度更高。

Note

造成灵敏度差异的原因主要是因为DNA酶的使用。RT-PCR只能提取DNA+RNA的混合物，之后需要用DNA酶去除里面的DNA，这个操作步骤既不能保证DNA完全去除干净，同时也会降解掉部分RNA，造成RNA定量不准确。而SAT只特异性提取和扩增RNA，不需要用DNA酶处理，直接定量更精准。

选操作方便的

新冠疫情对检验科的考验巨大，目前医院发热门诊依然需要对所有就诊患者进行新冠病毒核酸检测，并且在短时间内出报告，检验科工作量浩大，人手严重不足。因此要开新项目，人力问题是考量关键。所以操作越简单，人工步骤越少的产品越好，全自动检测的平台将成为分子检测的发展方向。

SAT（RNA捕获探针法）采用的设备自动化程度较高，采血管原管上机，样本进、结果出，全程无人工步骤。RT-PCR（PCR-荧光探针法）一共需要5个步骤，包括核酸提取、DNA酶处理、将处理后的核酸转移至扩增管（需提前人工配制反应试剂）进行扩增、人工判读结果和后续的结果录入，这些都需要人工操作。过多的人工操作，不仅仅在实验流程上显得繁琐，更严重的是会降低实验的可重复性、影响灵敏度，最终影响定量检测结果。

选报告速度快的

大家肯定都有过类似的经历，做的核酸等半天都不出结果。造成这个问题的核心是因为PCR是批处理，攒够一批样本才能上机，因此大家在等核酸的时间，或许大部分都在等“攒样本“。乙肝是个慢性病，患者平时都会去门诊随访，所以最怕检查结果出不来，影响当天配药。RT-PCR（PCR-荧光探针法）这种批处理模式，一般是第二天检测前一天的样本。SAT（RNA捕获探针法）是 ”随到随检“的流水线模式，样本到了即可上机，90分钟就能报告。若有急诊样本，还可以设置”急诊优先“模式，让后上机的样本优先做，灵活性极强。

小结

当前的终端市场尤为关注检测质量及检测效率，在选择HBV RNA检测产品时，首先选择检测灵敏度高、不易漏检的产品，另一方面，选择能够搭载全自动检测平台的产品，它将会成为进军乙肝核酸检测大市场的良好助力。